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《中國藥(yào)典》2010版微生物限度檢查(chá)專題(tí)

更新(xīn)時(shí)間：2015-04-03

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1，微(wēi)生(shēng)物(wù)方法驗證(zhèng)，要求菌株(zhū)回收(shōu)率≧70%，是(shì)否(fǒu)有上限要求？（如(rú)不得(dé)高於(yú)100%或者(zhě)110%）。

答：沒有上(shàng)限(xiàn)。但(dàn)一般(bān)不(bù)會高於100%，因為加(jiā)進去(qù)的(dí)菌量是(shì)一樣的(dí)，如果(guǒ)超過100%可(kě)看(kàn)成(chéng)是操作(zuò)上(shàng)的(dí)誤(wù)差。按微(wēi)生物的(dí)特性，如果不超過太(tài)多(duō)，是可以接(jiē)受(shòu)的，但(dàn)沒有具體上限。（本(běn)所(suǒ)控製(zhì)在(zài)110%以(yǐ)內(nèi)）。

2，在(zài)微生物方法(fǎ)驗證(zhèng)時(shí)，黴(méi)菌，酵母菌計數(shù)驗(yàn)證(zhèng)隻(zhī)用(yòng)黑曲黴(méi)及白(bái)色(sè)念珠(zhū)菌做(zuò)方法學驗(yàn)證(zhèng)，在(zài)操作(zuò)培養(yǎng)過程(chéng)中發(fā)現：在(zài)玫瑰(guī)紅鈉(nà)瓊(qióng)脂(zhī)培(péi)養生長的(dí)白色念珠菌(jūn)的形態(tài)太小(xiǎo)與營養瓊脂(zhī)上培養的細(xì)菌的某(mǒu)些(xiē)形(xíng)態大小相同(tóng)，這樣如何判斷營(yíng)養(yǎng)瓊脂(zhī)上(shàng)生長的菌(jūn)落(là)是(shì)否(fǒu)是白色念珠(zhū)菌？為何這兩種菌落形態(tài)相似？

答(dá)：菌落形(xíng)態(tài)相(xiāng)似不等於就(jiù)是(shì)同一種(zhǒng)菌(jūn)。在驗證時，營(yíng)養(yǎng)瓊脂的(dí)驗證菌株(zhū)為(wéi)大腸埃希(xī)菌，金黃色葡(pú)萄(táo)球菌和(hé)枯草(cǎo)芽孢杆(gān)菌，如(rú)果本底菌為0，則營(yíng)養(yǎng)瓊(qióng)脂(zhī)上(shàng)長(cháng)的(dí)菌應該不(bù)是白色(sè)念珠菌(jūn)。要(yào)判斷(duàn)是否為白色(sè)念珠(zhū)菌(jūn)，應(yīng)進行(háng)白色念珠菌的相應鑒定方法(fǎ)後才(cái)能確定。任何微生物都不可(kě)能隻是(shì)從(cóng)菌落就(jiù)可以進行判斷，隻能判(pàn)斷為疑似(sì)，然後再(zài)做一(yī)係列相(xiāng)應的鑒定實驗後(hòu)才能進(jìn)行(háng)判斷。

3，生孢(bāo)梭菌的適(shì)宜(yí)計數(shù)用(yòng)培養基？（很(hěn)多驗證(zhèng)需對生孢(bāo)梭菌(jūn)進行(háng)計(jì)數）

答(dá)：zui簡(jiǎn)便的(dí)方法是用硫(liú)乙醇酸鹽(yán)流(liú)體(tǐ)培(péi)養基。該培(péi)養(yǎng)基上(shàng)層為含氧層，適宜需(xū)氧(yǎng)菌(jūn)生(shēng)長，下(xià)層(céng)為厭氧層（下(xià)層高度(dù)7cm以上(shàng)），適(shì)宜厭氧(yǎng)菌(jūn)生(shēng)長(cháng)。在培養16~18小(xiǎo)時(shí)這個(gè)時(shí)間(jiān)進(jìn)行(háng)觀察，計數(shù)，超過20小(xiǎo)時(shí),由(yóu)於繁殖量(liáng)大，培養(yǎng)基將混(hùn)濁(zhuó)，點計不清(qīng)。或者(zhě)是用哥(gē)倫(lún)比亞瓊脂培養基，澆(jiāo)注後，置厭氧(yǎng)罐(guàn)（袋）裏(lǐ)，再置培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)培養，計數。

4，微生物限(xiàn)度(dù)檢(jiǎn)查法中所(suǒ)用的培(péi)養基要進行適用性檢(jiǎn)查試(shì)驗(yàn)，請問(wèn)這些(xiē)培養(yǎng)基還需(xū)要做(zuò)無菌檢查(chá)試驗嗎？

答(dá)：微(wēi)生(shēng)物限度檢查，藥典(diǎn)上(shàng)沒有特(tè)別說明(míng)對培養基(jī)作(zuò)無菌性檢(jiǎn)查，但(dàn)每次都要做(zuò)陰(yīn)性對照(zhào)實驗，陰性對照是檢查整個檢(jiǎn)驗係統(tǒng)是否被微(wēi)生物(wù)汙(wū)染(rǎn)，實(shí)際上也(yě)包括了培(péi)養基的(dí)無(wú)菌(jūn)性檢查(chá)。

5，微(wēi)生物(wù)限度檢查法中所用的培養基如：營養瓊(qióng)脂(zhī)，EMB，Macl等(děng)培(péi)養基(jī)其(qí)分裝容(róng)器(qì)需(xū)要預先滅(miè)菌嗎？

答(dá)：不(bù)用。隻(zhī)要是(shì)潔(jié)淨(jìng)的(dí)就行，因為(wéi)分裝(zhuāng)後還(huán)要(yào)滅(miè)菌。

6，具(jù)有(yǒu)抑菌(jūn)性(xìng)的供試(shì)品(pǐn)，細(xì)菌，黴菌(jūn)，都(dū)是用薄膜過濾(lǜ)法來(lái)檢(jiǎn)查的(dí)，那(nà)麼(mó)沙門菌可以用常(cháng)規(guī)法(fǎ)來檢查嗎？就(jiù)是(shì)可以不(bù)經過過(guò)濾直接接種到營養肉(ròu)湯中嗎？

答：這要看你(nǐ)驗證的結果。如果通過(guò)驗證(zhèng)，你的(dí)品(pǐn)種(zhǒng)是對沙門(mén)菌有(yǒu)抑製作用(yòng)，且用培養基稀釋(shì)法(fǎ)不能消除其(qí)抑菌性，則就必需考慮(lǜ)用(yòng)薄(báo)膜過濾法。

7，微生物(wù)限(xiàn)度檢查(chá)中(zhōng)，稀釋劑(jì)對(duì)照組，是在(zài)稀釋液中(zhōng)加入(rù)50~100cfu的(dí)菌，還是(shì)把(bǎ)稀(xī)釋液製成含(hán)量50~100cfu的濃度呢？

答：是(shì)把稀釋液製成含(hán)50~100cfu/ml菌的濃(nóng)度。（在(zài)這裏，我對(duì)上次(cì)講(jiǎng)課時關(guān)於稀釋(shì)劑對照組操作的PPT進(jìn)行糾正，對於(yú)離(lí)心薄膜過濾法(fǎ)的稀釋劑對照(zhào)組(zǔ)的(dí)操(cāo)作應該是：含50~100cfu/ml菌(jūn)的稀(xī)釋(shì)液離心取(qǔ)稀釋(shì)液（與試(shì)驗組同樣取(qǔ)上層液）過濾(lǜ)，衝洗(xǐ) 貼平板(bǎn)）

8，稀釋(shì)級對(duì)照組(zǔ):含50~100cfu/ml菌稀(xī)釋液→離(lí)心→取(qǔ)供試液稀釋液過(guò)濾(lǜ)，衝(chōng)洗(xǐ)→貼平(píng)板(bǎn)。這裏(lǐ)需要(yào)加供試(shì)液嗎(má)？是否(fǒu)應(yīng)為上述離(lí)心後(hòu)的(dí)菌液？答(dá)：不需要取供試液，隻取(qǔ)“上述離心後的菌液(yè)"。關(guān)於(yú)這一情況(kuàng)，我在第7題(tí)裏(lǐ)已(yǐ)經作了(liǎo)說明。

9，當(dāng)要做稀釋劑(jì)對照(zhào)組(zǔ)時(shí)，是否就是(shì)從製備(bèi)供(gōng)試(shì)品時就同時(shí)做(zuò)一(yī)份不(bù)含(hán)供試品(pǐn)而(ér)是含菌50~100cfu的樣品(pǐn)？等(děng)於按同一個方法(fǎ)製(zhì)備一個(gè)供試品，五(wǔ)個含菌稀釋(shì)液對照(zhào)組(zǔ)？

答(dá)：是(shì)的。

10，菌(jūn)落計數是否(fǒu)需要(yào)將每天計數的數(shù)據登(dēng)記在(zài)記(jì)錄(lù)本上(shàng)，是(shì)否可(kě)以隻(zhī)記(jì)錄(lù)zui終(zhōng)的數據？

答：可(kě)以(yǐ)。每(měi)天(tiān)計數的(dí)目(mù)的(dí)是(shì)預(yù)防菌落彌(mí)漫(màn)互相覆蓋，幹擾(rǎo)zui終的點計(jì)。你(nǐ)可(kě)以用(yòng)油(yóu)性(xìng)筆將(jiāng)每天(tiān)點(diǎn)計(jì)的(dí)數記錄在(zài)培養皿(mǐn)上，發報告時(shí)隻(zhī)要zui終菌落(là)數(shù)就行了。

11，若(ruò)樣品(pǐn)中(zhōng)有(yǒu)不(bù)溶(róng)物(wù)（如片劑中的輔(fǔ)料顆粒(lì)），經(jīng)常會(huì)影(yǐng)響(xiǎng)培養(yǎng)前(qián)期的(dí)結(jié)果，藥典要(yào)求逐(zhú)日計(jì)數，所以報告(gào)中會出現第(dì)二，三(sān)日菌(jūn)落(là)數(shù)小於(yú)*日(rì)的(dí)現象，請問(wèn)該(gāi)如何向客(kè)戶或監檢機構(gòu)解釋這(zhè)種結果？或(huò)者是否(fǒu)可(kě)以(yǐ)不計(jì)*，二日菌(jūn)落數，待輔(fǔ)料顆(kē)粒與(yǔ)菌落可(kě)以區(qū)分(fēn)後(hòu)再(zài)計(jì)數？

答：報告書不(bù)需(xū)要(yào)顯(xiǎn)示(shì)*，第(dì)二天(tiān)的結果，隻(zhī)需(xū)報(bào)告(gào)zui終結(jié)果。理(lǐ)由請見第(dì)9題(tí)答復。或者是(shì)在營養(yǎng)瓊脂(zhī)中(zhōng)加入TTC試劑（每(měi)100ml加入(rù)0.1%）

12，由(yóu)於(yú)微(wēi)生物檢驗的特殊性，對於樣(yàng)品(pǐn)的(dí)微(wēi)生物(wù)限度(dù)檢查計(jì)數數據(jù)是否可登(dēng)記在表格內（此表(biǎo)格僅(jǐn)含樣(yàng)品(pǐn)名(míng)稱(chēng)，批號(hào)及檢查結(jié)果(guǒ)）。之後再將檢(jiǎn)測結果(guǒ)移至詳(xiáng)細(xì)記(jì)錄(lù)中？

答：原始(shǐ)記錄(lù)應該隻(zhī)有(yǒu)1份(fèn)。如(rú)果你(nǐ)說的詳細(xì)記(jì)錄是屬於(yú)一般(bān)記錄，是(shì)沒(méi)有必(bì)要(yào)的(dí)，如果(guǒ)是(shì)指報(bào)告(gào)書，就(jiù)應該(gāi)沒問(wèn)題(tí)。這要(yào)看(kàn)你(nǐ)自(zì)己訂的SOP。

13，直(zhí)接(jiē)接(jiē)種法培養(yǎng)後的菌(jūn)落(là)報告：原(yuán)液(yè)230cfu,稀(xī)釋(shì)10倍後 40cfu,請問(wèn)按(àn)2010版藥(yào)典的(dí)菌落(là)數報(bào)告規則(zé)如(rú)何(hé)報告(gào)菌落數？

答：報(bào)告菌落數為40×10=400cfu。應以菌落數乘以(yǐ)稀(xī)釋倍(bèi)數後的(dí)zui大值作(zuò)為(wéi)報(bào)告結果(guǒ)。

14，05版藥典供試(shì)品離心5分鐘(zhōng)，而10版藥典改(gǎi)用(yòng)離(lí)心(xīn)3分鐘，原來(lái)按5分鐘(zhōng)驗證(zhèng)的(dí)產品(pǐn)是否(fǒu)需(xū)要重新(xīn)驗(yàn)證？

答：是的(dí)。需要再確認一下(xià)。

15，10版(bǎn)藥(yào)典附(fù)錄微生物(wù)限度(dù)檢(jiǎn)查法中結(jié)果(guǒ)判(pàn)斷的菌(jūn)落(là)計(jì)數單(dān)位(wèi)是以(yǐ)“cfu"表示，但(dàn)正文品種項(xiàng)下是(shì)以(yǐ)“個"表示，zui終應(yīng)以(yǐ)哪位為(wéi)準(zhǔn)呢(ní)？

答：應該(gāi)是(shì)以(yǐ)cfu為(wéi)單位。正(zhèng)文(wén)是由於印刷時(shí)沒統(tǒng)一(yī)修改(gǎi)過來(lái)，關於(yú)這個(gè)問(wèn)題(tí)，在(zài)增補本上修訂(dìng)過來。（在(zài)增補本(běn)沒(méi)出(chū)來(lái)之前，正文(wén)品(pǐn)種還是(shì)以個為(wéi)單位）

16，為何(hé)控製菌(jūn)液的濃度為(wéi)50-100cfu/ml。

答(dá)：50-100cfu在(zài)平(píng)板(bǎn)上比(bǐ)較好點(diǎn)計，菌落(là)不容易(yì)重疊。少於50，則實(shí)驗(yàn)誤(wù)差(chà)會增(zēng)大，重現(xiàn)性不好，大於(yú)100則容(róng)易造成菌(jūn)落(là)太(tài)密或(huò)重(zhòng)疊不好(hǎo)計(jì)數。

17，藥(yào)典上控(kòng)製菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)的方法(fǎ)驗(yàn)證(zhèng)，隻是說(shuō)把(bǎ)菌加至增(zēng)菌(jūn)培(péi)養(yǎng)基(jī)中檢出(chū)即可，那(nà)我們實際(jì)做(zuò)驗證與記錄時(shí)，是(shì)否(fǒu)要(yào)做增菌以(yǐ)後的步驟呢？

答：要(yào)。不然你怎麼(mó)知道(dào)檢(jiǎn)出來(lái)的(dí)菌是你加進(jìn)去的(dí)試(shì)驗(yàn)菌呢？

18，采用薄(báo)膜過濾法(fǎ)檢(jiǎn)驗(yàn)，陽性(xìng)菌，計數(shù)是(shì)否(fǒu)也用(yòng)此方(fāng)法(fǎ)計數？

答：是(shì)的。

19，對於10版藥典延長培養時間，控(kòng)製(zhì)菌(jūn)35-37℃改為(wéi)30-35℃培養溫(wēn)度，一些已(yǐ)經(jīng)驗證(zhèng)（按(àn)05版藥典）檢(jiǎn)品是否需要重新驗證(zhèng)？是否有必(bì)要(yào)進(jìn)行(háng)延長時間前(qián)後菌(jūn)生長情況變化的驗證試驗(yàn)？

答(dá)：目前(qián)沒有相關(guān)性規(guī)定，我們認(rèn)為可按原來(lái)已經驗(yàn)證(zhèng)的方法，用2010年版(bǎn)的(dí)培養時間(jiān)和(hé)溫(wēn)度(dù)再確認一(yī)下(xià)，如果(guǒ)結果(guǒ)符合藥(yào)典要求，則(zé)可用。如果(guǒ)不(bù)可行(háng)，則調整(zhěng)後(hòu)再進(jìn)行驗證(zhèng)。

20，若無(wú)需都(dū)重新驗(yàn)證，那麼參照(zhào)標準(zhǔn)為05版(bǎn)藥典，又(yòu)可(kě)以通過什麼文(wén)件來更(gēng)改為(wéi)參照(zhào)10版藥(yào)典？

答：請看上一題(tí)。

21，檢(jiǎn)驗控製菌用培(péi)養基(jī)促(cù)生長(cháng)能(néng)力的檢(jiǎn)查，也需要對照(zhào)培(péi)養基嗎？例如(rú)：大腸(cháng)埃(āi)希(xī)菌(jūn)用(yòng)的BL增(zēng)菌(jūn)液。

答：是的。請看(kàn)附錄“微生(shēng)物(wù)限度(dù)檢查(chá)法(fǎ)"中(zhōng)的表(biǎo)2。

22，10版(bǎn)藥典(diǎn)增加貼(tiē)膏劑(jì)的檢查，狗(gǒu)皮(pí)貼膏藥屬於(yú)貼(tiē)膏劑嗎(má)？

答(dá)：應(yīng)該(gāi)是(shì)的。請對照《中(zhōng)國藥典(diǎn)》一(yī)部附(fù)錄(lù)P8進行(háng)確定(dìng)。

23，請問(wèn)若(ruò)試(shì)驗(yàn)條件(jiàn)限製未能使用匀漿儀(yí)製備(bèi)非規定(dìng)滅菌(jūn)製(zhì)劑是(shì)否可(kě)采(cǎi)用溫(wēn)熱(rè)（不(bù)超(chāo)過(guò)45℃）的(dí)稀(xī)釋液(yè)？

答(dá)：如果(guǒ)能(néng)夠充分分散(sàn)樣品(pǐn)，可以(yǐ)的。

24，請問若(ruò)采(cǎi)用(yòng)薄(báo)膜(mó)過濾(lǜ)法(fǎ)進行驗(yàn)證，由於過濾(lǜ)難(nán)度大，是(shì)否可以每膜過(guò)濾相當(dāng)於(yú)供試品0.1g，報(bào)告(gào)以(yǐ)結(jié)果乘(chéng)以10？

答(dá)：驗(yàn)證(zhèng)計(jì)數(shù)時(shí)可以(yǐ)的，驗證控製菌(jūn)時(shí)檢驗(yàn)總量(liáng)應達(dá)到藥典要求，如(rú)果一(yī)張膜檢(jiǎn)驗量達(dá)不到，可分(fēn)幾(jī)個(gè)膜。

25，請問采(cǎi)用靜(jìng)置(zhì)分(fēn)層取(qǔ)上清(qīng)液薄膜(mó)過濾，是否需要加稀釋劑對照組？

答(dá)：個(gè)人觀點(diǎn)可以不用,但(dàn)未經(jīng)驗證。

26，供(gōng)試品靜(jìng)置(zhì)分(fēn)層(céng)取上(shàng)清液進(jìn)行(háng)試驗(yàn)，靜置3~5分鐘(zhōng)，是(shì)否經過驗(yàn)證供試品的本底(dǐ)菌不(bù)會沉到底部(bù)？

答(dá)：未經(jīng)驗(yàn)證。

27，培(péi)養(yǎng)基適用(yòng)性檢(jiǎn)查，抑製能力檢查用菌(jūn)種(zhǒng)是哪些？

答(dá)：控製菌(jūn)的培養(yǎng)基適用(yòng)性檢(jiǎn)查,請看藥(yào)典“微(wēi)生(shēng)物(wù)限度檢(jiǎn)查法"中(zhōng)表2，計(jì)數用(yòng)培(péi)養基(jī)請看(kàn)“計(jì)數(shù)培養基的(dí)適用性檢(jiǎn)查"。

28，投料中有(yǒu)神(shén)曲(qū)提取物，限(xiàn)度應界定(dìng)為多少？

答：不是(shì)藥材(cái)原粉投料(liào)，標(biāo)準(zhǔn)均按(àn)“不含藥(yào)材原粉的製(zhì)劑(jì)"執(zhí)行。

29，微生物(wù)限度檢查裏有(yǒu)關經驗(yàn)類的東西都必須經過(guò)驗(yàn)證才可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用,那(nà)麼驗證(zhèng)的(dí)內容包(bāo)括(kuò)哪些(xiē)數據應(yīng)記錄，是否(fǒu)也應(yīng)該(gāi)有文件與(yǔ)記錄(lù)？

答：參照藥典，你是(shì)作什麼樣的檢(jiǎn)驗，就(jiù)作什麼(mó)樣的(dí)驗(yàn)證(zhèng)，有驗證就應該(gāi)有記錄。

30，比如10倍(bèi)稀(xī)釋級菌落數為(wéi)0，100倍稀釋級菌落(là)數(shù)為2，按(àn)2005年(nián)版藥(yào)典應(yīng)以(yǐ)低稀(xī)釋(shì)級(jí)菌落(là)數(shù)報(bào)告(gào)為(wéi)＜10，還是按(àn)zui高平(píng)均菌(jūn)落數(shù)乘以稀釋倍(bèi)數報告為(wéi)200個(gè)/g，是否理解正確？

答：按《中國藥典(diǎn)》2005年(nián)版報(bào)告應(yīng)為(wéi)＜10個/g（或ml），按(àn)《中(zhōng)國(guó)藥典》2010年(nián)版報告應(yīng)為200cfu/g（或ml）。

31，計數方法(fǎ)的驗證：執行(háng)新(xīn)版(bǎn)藥(yào)典(diǎn)是否就(jiù)延長培養(yǎng)時(shí)間做方(fāng)法驗證？

答：是。

32，平(píng)皿法中(zhōng)提到“每個(gè)稀釋級(jí)每(měi)種培養(yǎng)基至少檢驗2ml供(gōng)試液"，是(shì)每(měi)皿注2ml還是(shì)每(měi)皿注1ml？如(rú)要做(zuò)0.5ml或0.2ml，本級(jí)是否還需(xū)做1ml?答：常(cháng)規平(píng)皿法(fǎ)時(shí)每皿(mǐn)注(zhù)1ml，做2個皿；培(péi)養(yǎng)基稀(xī)釋(shì)法(fǎ)（即每皿(mǐn)0.5ml或(huò)0.2ml）時，供試(shì)液總量(liáng)也(yě)應是2ml，每1ml菌落數合(hé)計後，2ml的菌(jūn)落(là)數(shù)再(zài)平均；本級就(jiù)不需(xū)做1ml了(liǎo)，但(dàn)下一(yī)級就隻(zhī)做1ml/皿就(jiù)行了。

33，在(zài)細菌(jūn)黴菌計(jì)數檢查(chá)中(zhōng)，老師提到的每(měi)個稀(xī)釋級每(měi)種培養基至少檢驗2ml供試(shì)液，但2010版藥(yào)典(diǎn)上(shàng)並(bìng)沒有(yǒu)要(yào)求要這(zhè)樣做，那(nà)應以哪個(gè)做法為(wéi)準？

答：藥典中對(duì)平皿法(fǎ)的描述：平皿(mǐn)法“取供(gōng)試液1ml，置直徑(jìng)90mm 的無(wú)菌平(píng)皿中，注入(rù)15～20ml 溫度不超過(guò)45℃的溶(róng)化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養基或(huò)玫瑰(guī)紅鈉瓊(qióng)脂培養(yǎng)基或酵(jiào)母浸出粉(fěn)腖(dòng)葡(pú)萄(táo)糖(táng)瓊脂(zhī)培(péi)養基，混匀(yún)，凝固，倒置培(péi)養(yǎng)。每稀(xī)釋級(jí)每種培養基(jī)至(zhì)少製備2 個平(píng)板(bǎn)。"這裏(lǐ)的描(miáo)述是以(yǐ)常規(guī)平皿(mǐn)法進行描述(shù)的，所以(yǐ)“每稀釋(shì)級(jí)每(měi)種(zhǒng)培養(yǎng)基至少製備2 個(gè)平(píng)板"，也就(jiù)是(shì)2ml的量(liáng)。對(duì)於培養基(jī)稀釋(shì)法，請(qǐng)看藥典供試液的製備中3. (6) ①。

34，10版(bǎn)藥(yào)典要(yào)求(qiú)檢(jiǎn)查(chá)沙門菌(jūn)的供試(shì)品，其檢驗量應(yīng)增(zēng)加20g或20ml，（其(qí)中10g或10ml用於陽性對(duì)照試(shì)驗）是否(fǒu)指20g或20ml樣品(pǐn)中(zhōng)10g或10ml直接(jiē)用(yòng)於沙(shā)門菌(jūn)控(kòng)製(zhì)檢查，另10g或(huò)10ml加pH7.0的緩衝液100ml作為1：10的(dí)供試品(pǐn)溶液作為細菌(jūn)，黴菌(jūn)，酵母菌的檢驗嗎？還是指(zhǐ)20g都用(yòng)於(yú)沙門(mén)菌檢(jiǎn)查？

答(dá)：20g都(dū)是用於沙(shā)門(mén)菌檢查(chá)。沙(shā)門(mén)菌的檢(jiǎn)查法是：取(qǔ)3份(fèn)200ml營養肉(ròu)湯，其中2份分別加(jiā)入(rù)10g或(huò)10ml樣品，取其(qí)中1份加入(rù)10~100cfu菌液作陽(yáng)性對照(zhào)。第3份加(jiā)入10ml稀釋劑作陰(yīn)性(xìng)對照進(jìn)行(háng)檢(jiǎn)查，所以(yǐ)。細菌，黴菌，酵母(mǔ)菌檢(jiǎn)驗的樣品不(bù)包(bāo)括(kuò)在這(zhè)裏(lǐ)。

35，沙門菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)為(wéi)10g或10ml，為何(hé)一次檢查量又為20g或20ml？（P130）答(dá)：其中(zhōng)10g（或10ml）是(shì)檢(jiǎn)驗用(yòng)的(dí)，另10g（或10ml）是(shì)用於陽(yáng)性對照(zhào)試(shì)驗的。請看上(shàng)一題(tí)目解(jiě)釋。

36，采用(yòng)薄膜(mó)過濾(lǜ)法時(shí)，濾(lǜ)膜(mó)采(cǎi)用何種方(fāng)法滅菌？

答(dá)：據我們經驗(yàn)，采用(yòng)一次(cì)性(xìng)過(guò)濾器。如果用多次使用(yòng)的(dí)過濾器，則濾膜用濕熱滅菌比較(jiào)好，因(yīn)為幹(gān)熱(rè)滅菌後，濾膜(mó)較(jiào)脆，試驗(yàn)時(shí)不(bù)容(róng)易保(bǎo)證濾膜(mó)完整(zhěng)。

37，方法學(xué)驗(yàn)證(zhèng)時，采(cǎi)用平(píng)皿(mǐn)法稀釋(shì)級(jí)計數，是否要做稀(xī)釋級對照(zhào)組？

答：稀(xī)釋(shì)級對(duì)照組(zǔ)？是指(zhǐ)本底菌(jūn)組嗎(má)？如(rú)果是(shì)，那就要。因為(wéi)要平行(háng)試驗，才能(néng)知道(dào)同一(yī)稀釋級(jí)的(dí)本底菌(jūn)是多(duō)少。如果(guǒ)是(shì)指(zhǐ)稀(xī)釋劑(jì)對照(zhào)組(zǔ)，就不(bù)用，因為(wéi)所(suǒ)用的(dí)稀(xī)釋劑是藥(yào)典(diǎn)規(guī)定的，是(shì)無毒性的稀(xī)釋(shì)劑(jì)。

38，方法驗證的培養(yǎng)基(jī)稀(xī)釋法(fǎ)驗證（樣品0.2ml）隻做2個(gè)平皿，每個(gè)平皿的加(jiā)菌量(liáng)是多少？如(rú)果同步加(jiā)0.2ml菌(jūn)，其(qí)加(jiā)菌量(liáng)就達(dá)不到50~100cfu。

答：不管每皿加的供試液的量是多少，每皿加菌(jūn)液的量(liáng)都是(shì)1ml ,即(jí)都(dū)是50~100cfu。

39，平皿法(fǎ)（稀(xī)釋法(fǎ)）計(jì)數(shù)驗證時，取(qǔ)zui低稀(xī)釋供(gōng)試液如(rú)0.5ml和50~100cfu試驗菌(jūn)，那50~100cfu的試(shì)驗菌是指50~100cfu還是50~100cfu∕0.5ml？我們(mén)是要加1ml還(huán)是(shì)0.5ml的試驗菌(jūn)？

答：平(píng)皿(mǐn)法（稀釋(shì)法）計數驗(yàn)證(zhèng)時(shí)，每(měi)皿要(yào)加的菌液(yè)是50~100cfu，一(yī)般我們配製的菌液濃度(dù)是(shì)50~100cfu/ml，所以就(jiù)加(jiā)1ml。如果你配製的菌液不(bù)是這個(gè)濃(nóng)度，你(nǐ)可以折算，隻(zhī)要加(jiā)的菌(jūn)數是50~100cfu/皿(mǐn)就行了(liǎo)。

40，細(xì)菌黴菌方法驗證，同時做1ml，0.5ml，0.2ml供試(shì)品(pǐn)組及(jí)供試品驗(yàn)證組時，菌液是否(fǒu)也(yě)按(àn)1ml，0.5ml，0.2ml分(fēn)別(bié)加入(rù)？此時1ml，0.5ml，0.2ml供(gōng)試(shì)品驗(yàn)證組中的(dí)菌數能否也(yě)達到50~100cfu？

答：驗證(zhèng)時，不(bù)論(lùn)是1ml，0.5ml，0.2ml的供(gōng)試(shì)液(yè)，每皿(mǐn)的加菌(jūn)量都(dū)是50~100cfu，即1ml（如(rú)果(guǒ)你配製的(dí)菌(jūn)液濃度是(shì)50~100cfu/ml）。

41，培養(yǎng)基(jī)稀釋方(fāng)法驗證，每(měi)皿(mǐn)0.2ml，加(jiā)菌液(yè)0.2ml，那(nà)麼(mó)0.2ml的(dí)菌液計(jì)數是(shì)否(fǒu)在(zài)50~100cfu∕0.2ml。

答：請(qǐng)看(kàn)上(shàng)一題的解(jiě)釋。

42，微生(shēng)物(wù)限度檢(jiǎn)查(chá)黴(méi)菌(jūn)，酵母菌要求不超過100的情況(kuàng)下，這兩(liǎng)種菌是(shì)不(bù)是要分開來檢，用不同培養(yǎng)基(jī)檢(jiǎn)測(cè)？目前(qián)隻用(yòng)玫瑰(guī)紅(hóng)鈉瓊脂(zhī)培養(yǎng)基檢(jiǎn)測這兩(liǎng)種(zhǒng)菌，有沒(méi)有必(bì)要(yào)修改？

答：按藥(yào)典(diǎn)規定(dìng)，一般(bān)品(pǐn)種是用(yòng)玫瑰紅(hóng)鈉(nà)瓊脂培(péi)養基檢(jiǎn)測這兩種(zhǒng)菌(jūn)；含(hán)蜂(fēng)蜜(mì)，王(wáng)漿的液(yè)體(tǐ)製劑，用玫(méi)瑰(guī)紅(hóng)鈉瓊脂培(péi)養基測(cè)定黴(méi)菌數(shù)，用(yòng)酵母(mǔ)浸(jìn)出粉腖葡萄(táo)糖(táng)瓊脂培(péi)養基測定酵(jiào)母(mǔ)菌(jūn)數(shù)，合(hé)並計(jì)數(shù)。

43，測表麵(miàn)微生(shēng)物時，直接接觸(chù)藥(yào)品與(yǔ)間接接(jiē)觸藥品(pǐn)的限度（≤25）一致(zhì)，是(shì)否(fǒu)有不妥(tuǒ)，如(rú)果有(yǒu)不(bù)同(tóng)意(yì)見，可(kě)否(fǒu)提(tí)供(gōng)其計數方(fāng)法？另外(wài)，如(rú)果檢(jiǎn)測(cè)到菌(jūn)落數超過100以(yǐ)上，那麼(mó)報告規則的菌(jūn)數(shù)也是取(qǔ)兩位(wèi)有效(xiào)數(shù)字嗎(má)？

答(dá)：“測(cè)表(biǎo)麵微生物(wù)"？這應(yīng)該(gāi)是藥包(bāo)材的(dí)檢測標準(zhǔn)吧(bā)？由(yóu)於我(wǒ)們尚未開(kāi)展這(zhè)項(xiàng)業務(wù)，所以對(duì)其標準(zhǔn)情況不(bù)了(liǎo)解(jiě)，但既然已經成為標(biāo)準(zhǔn)，就肯定有(yǒu)其合理(lǐ)性，如有不同意見(jiàn)，可(kě)向標準製(zhì)訂部(bù)門反映(yìng)，並提出你認為(wéi)合理的解決辦(bàn)法(fǎ)。微(wēi)生物的報告規(guī)則一般都(dū)是(shì)取(qǔ)兩位(wèi)有效(xiào)數(shù)字(zì)。

44，內包(bāo)裝材(cái)料(liào)PVC硬(yìng)片(piàn)，鋁箔等(děng)樣(yàng)品的微生物檢驗（限(xiàn)度(dù)）方法？

答：是藥(yào)包材的檢(jiǎn)驗(yàn)？應(yīng)該(gāi)有相應的(dí)檢驗(yàn)方(fāng)法(fǎ)吧！

45，控(kòng)製菌檢查(chá)，大(dà)腸(cháng)埃希菌(jūn)IMViC試驗，結(jié)果顯示未檢出(chū)，有沒有(yǒu)硬性規(guī)定必(bì)須要(yào)進(jìn)一步鑒(jiàn)定？

答：對(duì)於(yú)大腸埃(āi)希菌(jūn)檢查(chá)，IMViC試驗(yàn)已(yǐ)經(jīng)是鑒(jiàn)定(dìng)試(shì)驗了，如果IMViC試驗結果顯示未檢(jiǎn)出，那(nà)麼就可(kě)以報告(gào)未檢出大腸(cháng)埃(āi)希(xī)菌。

46，菌數報(bào)告(gào)按(àn)兩(liǎng)位有(yǒu)效數字(zì)報告，是按數字(zì)修約(yuē)方法進(jìn)行數(shù)據修(xiū)約，還(huán)是隻(zhī)用(yòng)保留兩(liǎng)位(wèi)有(yǒu)效數字(zì)，如菌數為(wéi)364報(bào)告(gào)菌(jūn)數為360，還是(shì)370；若(ruò)菌數為(wéi)3670報告菌(jūn)數應為多(duō)少(shǎo)？

答：修(xiū)約原(yuán)則是4舍(shě)6入5留(liú)雙(shuāng)。即(jí)菌(jūn)數為364報告菌數(shù)為360；若菌(jūn)數為3670報(bào)告(gào)菌數應(yīng)為3700；如果(guǒ)是3650，則(zé)報告(gào)菌(jūn)數(shù)應(yīng)為(wéi)3600。

47，在(zài)日(rì)常檢驗中(zhōng)控製菌(jūn)檢驗(yàn)方(fāng)法(fǎ)通(tōng)過驗(yàn)證的(dí)控製菌檢驗可否(fǒu)不做陽性對照(zhào)？理解：在驗(yàn)證時(shí)已做(zuò)過(guò)控(kòng)製(zhì)菌供(gōng)試(shì)液(yè)，驗證(zhèng)時供試(shì)液(yè)對控製菌無抑(yì)菌(jūn)性(xìng)，若隻(zhī)是做控製菌(jūn)（不(bù)加供試(shì)液）則在培(péi)養基適用性時(shí)已證明培(péi)養(yǎng)基(jī)的(dí)質量，那麼每(měi)次試驗做(zuò)陽(yáng)性(xìng)對照的意(yì)義是什(shí)麼？或者(zhě)陽(yáng)性對照試(shì)驗(yàn)怎麼(mó)做(zuò)？

答：從(cóng)理論(lùn)上來說是(shì)可以(yǐ)的，驗(yàn)證試驗(yàn)實(shí)際(jì)上就(jiù)是檢驗時的(dí)陽(yáng)性對(duì)照試(shì)驗。但藥(yào)典(diǎn)要求控(kòng)製菌檢查時必(bì)需同(tóng)時從陽性對照和陰(yīn)性(xìng)對照，這應該(gāi)是(shì)考慮(lǜ)到檢驗(yàn)過程(chéng)的(dí)檢驗係統的(dí)誤(wù)差吧。本人認為(wéi)，生(shēng)產廠(chǎng)家(jiā)對(duì)自己的(dí)產品(pǐn)在(zài)經驗證後，檢驗時(shí)如(rú)果每天(tiān)同一產品(pǐn)批(pī)量很大(dà)，可(kě)以(yǐ)隻做一(yī)個陽性對(duì)照(zhào)，但對於藥(yào)檢所(suǒ)則必(bì)須(xū)每(měi)批(pī)都做(zuò)，因(yīn)為對於同(tóng)一(yī)品種，不同(tóng)廠(chǎng)家其(qí)生(shēng)產工藝不(bù)盡(jìn)相同，在檢驗(yàn)過程(chéng)中對被(bèi)檢微(wēi)生(shēng)物的(dí)幹(gān)擾(rǎo)也不同(tóng)。因此(cǐ)，藥檢所應每批(pī)都做。

48，取(qǔ)樣量藥典要求(qiú)“從2個(gè)以(yǐ)上(shàng)zui小包裝單(dān)位中抽(chōu)取供(gōng)試品"，是(shì)否包(bāo)括2個(gè)？

答：包(bāo)括。

49，請問(wèn)藥(yào)廠自(zì)行做(zuò)的微(wēi)生物(wù)方法驗證是(shì)否需(xū)要經(jīng)過藥檢所的(dí)審核(hé)？若產(chǎn)品更改(gǎi)為輔料，重新(xīn)做方法(fǎ)驗證，是否需要(yào)到藥檢所(suǒ)備案或需要藥(yào)檢所(suǒ)審核？

答(dá)：藥(yào)廠自(zì)行做的(dí)微(wēi)生(shēng)物方法驗證不需要經過藥檢所(suǒ)的審核(hé)。同樣，重(zhòng)新驗證後也不需要。但(dàn)如(rú)果你的檢(jiǎn)品需(xū)要(yào)報注(zhù)冊(cè)檢驗，則你必(bì)需(xū)提(tí)供你(nǐ)的整(zhěng)個驗證(zhèng)資(zī)料，藥(yào)檢(jiǎn)所將(jiāng)根據情(qíng)況(kuàng)對你的方法進行確(què)認(rèn)，看(kàn)方法是(shì)否可(kě)行(háng)。

50，是(shì)否(fǒu)每次做培養(yǎng)基(jī)適用性都必(bì)須(xū)與對(duì)照(zhào)培養基(jī)進行(háng)比較(jiào)？如(rú)果(guǒ)*批培養(yǎng)基與(yǔ)對照培(péi)養基比較回收(shōu)率為(wéi)90%，那麼第(dì)二批(pī)培養基與(yǔ)*批(pī)培(péi)養基比較回收(shōu)率(shuài)為(wéi)80%，則(zé)折算為(wéi)第(dì)二(èr)批培養基與(yǔ)對照培養(yǎng)基比(bǐ)較(jiào)回收率為72%，之(zhī)後購(gòu)買(mǎi)的培(péi)養基與(yǔ)前一批比較，而(ér)不(bù)用(yòng)每次培養(yǎng)基(jī)適(shì)用性都與對照培養(yǎng)基比(bǐ)較，這樣可不(bù)可行？

答：請按(àn)藥(yào)典要(yào)求做，至於(yú)內部(bù)控製(zhì)則要自己掌握(wò)。但(dàn)你(nǐ)要保證*批培(péi)養(yǎng)基(jī)在你(nǐ)用於與(yǔ)第二(èr)，第三批比較(jiào)時，質(zhì)量(liáng)保(bǎo)持(chí)其與(yǔ)對(duì)照(zhào)培養基比較時(shí)一樣，因(yīn)為(wéi)隨(suí)著時間的(dí)推移(yí)，培養(yǎng)基的質(zhì)量(liáng)肯定(dìng)有所(suǒ)下(xià)降。

51，微(wēi)生(shēng)物檢驗驗(yàn)證(zhèng)時，如(rú)我用一瓶普通(tōng)脫水(shuǐ)培(péi)養(yǎng)基(jī)與(yǔ)對照培養(yǎng)基測(cè)定(dìng)菌落(là)數，如(rú)普(pǔ)通脫水(shuǐ)培養基(jī)符(fú)合適用(yòng)性(xìng)檢查(chá)，那(nà)麼(mó)該瓶普通(tōng)脫(tuō)水(shuǐ)培(péi)養(yǎng)基(jī)能(néng)否(fǒu)作為以(yǐ)後工(gōng)作中(zhōng)的對照培養(yǎng)基來用(yòng)？

答：請看上一題的(dí)解釋(shì)。

52，培養時間(jiān)有要求(qiú)24~48h，也有要求(qiú)24~72h的，像(xiàng)這種時間(jiān)要求範(fàn)圍(wéi)比(bǐ)較大的情(qíng)況，如(rú)果(guǒ)在(zài)zui短的時間內(nèi)（如(rú)：24h）就(jiù)已經長菌，但(dàn)需(xū)進行後續(xù)實驗判斷(duàn)該(gāi)菌是否為(wéi)控(kòng)製(zhì)菌，那麼(mó)，是否需要(yào)培(péi)養到(dào)zui長時間（如(rú)：48h或(huò)72h）再(zài)進行後續實(shí)驗？

答：長勢好的(dí)話(huà)可以(yǐ)進行(háng)後續(xù)實驗不(bù)用等到zui長(cháng)時間。

53，操(cāo)作(zuò)結果(guǒ)的(dí)RSD%的範圍比(bǐ)較寬裕(yù)，是(shì)否可信？（eg：黑曲黴若(ruò)＞20cfu∕皿時，菌(jūn)落將(jiāng)擴散(sàn)至難以(yǐ)分離，所(suǒ)以(yǐ)回(huí)收(shōu)率度(dù)較低）

答：這(zhè)個問題要(yào)具體(tǐ)問題(tí)具(jù)體(tǐ)分(fēn)析。菌落漫延(yán)，這是要求逐日觀察的(dí)主要原(yuán)因之一，應在(zài)菌落能(néng)分(fēn)辨(biàn)的時(shí)候點(diǎn)計菌(jūn)落數。加菌(jūn)量太(tài)少，容(róng)易出現誤(wù)差大(dà)，重現性差(chà)，所(suǒ)以要求(qiú)加的菌數在(zài)50~100cfu。

54，含藥(yào)材(cái)細粉的(dí)膠囊(náng)如何(hé)製備供(gōng)試液(yè)？

答：按固體(tǐ)製劑供試(shì)液的(dí)製(zhì)備方法製備(bèi)，可(kě)用(yòng)45℃水浴(yù)軟(ruǎn)化(huà)溶解(jiě)膠囊殼。

55，大(dà)腸(cháng)菌群檢查，需(xū)陽(yáng)性(xìng)對(duì)照嗎(má)？

答：要(yào)的(dí)。陽性(xìng)對照菌為大(dà)腸埃(āi)希(xī)菌(jūn)。

56，菌(jūn)液塗(tú)布時(shí)，用接種棒還是塗布(bù)棒塗？

答：用(yòng)L型(xíng)塗(tú)布棒(bàng)，也(yě)可(kě)用(yòng)玻棒(bàng)自(zì)製。

57，控(kòng)製菌的培養基促生長(cháng)能力檢(jiǎn)查，對(duì)照菌(jūn)加(jiā)於固體培養基如(rú)何塗布，用(yòng)什麼工具來(lái)塗布？

答：請看上(shàng)一題。

58，三部(bù)藥典(diǎn)中有(yǒu)些(xiē)產(chǎn)品細菌(jūn)數(shù)，黴菌和(hé)酵母(mǔ)菌(jūn)數用每g多少cfu，但(dàn)有些為每g多(duō)少個(gè)，應怎(zěn)樣記錄？

答(dá)：應(yīng)該是cfu才(cái)對(duì)的，這些(xiē)應(yīng)該(gāi)是(shì)在轉(zhuǎn)版時(shí)沒轉過來(lái)吧(bā)，在(zài)增(zēng)補本應該(gāi)會(huì)轉過(guò)來。但是在沒(méi)轉(zhuǎn)過(guò)來之前，它(tā)還是(shì)法(fǎ)定的(dí)，必需按(àn)藥典上(shàng)的(dí)寫(xiě)法來(lái)執行。

59，如(rú)樣品的(dí)控(kòng)製(zhì)菌(jūn)為(wéi)大(dà)腸埃希菌(jūn)沒檢(jiǎn)出，但(dàn)檢出其它種菌(jūn)，結(jié)果(guǒ)該怎樣判定？

答(dá)：如果(guǒ)是其他致病(bìng)菌(jūn)，請(qǐng)看(kàn)微(wēi)生物限(xiàn)度檢查(chá)法的結果判斷(duàn)*句(jù)。

60，我們(mén)是做糖衣(yī)片的(dí)，微生(shēng)物限度檢查吸(xī)取供試液時，吸管有(yǒu)時會被(bèi)粉末塞住，那能(néng)不(bù)能讓供試液沉(chén)澱後取(qǔ)其上清液(yè)呢？這樣(yàng)操作(zuò)結果可靠嗎(má)？

答(dá)：請(qǐng)將(jiāng)藥片(piàn)盡可能打碎，如(rú)果還不(bù)能(néng)解決問(wèn)題，我們的(dí)經驗(yàn)是：可讓大(dà)藥渣沉降(jiàng)後取上層液(yè)進行試(shì)驗(yàn)，但沉降(jiàng)時(shí)間(jiān)盡可能短(在(zài)3-5分鐘(zhōng)內)，這(zhè)樣(yàng)做對結果會有一定(dìng)影響，但(dàn)應該(gāi)在(zài)可(kě)接受範圍(wéi)內。

61，微生物(wù)限(xiàn)度(dù)檢查(chá)控(kòng)製菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)時(shí)，如供試液(yè)的(dí)增菌後無(wú)菌生(shēng)長，可(kě)否(fǒu)直(zhí)接發(fā)供(gōng)試液(yè)的未(wèi)檢出控製(zhì)菌(jūn)，此(cǐ)時，陽性(xìng)對照試驗還(huán)需繼續做下去嗎(má)？

答：隻(zhī)要(yào)能判(pàn)定供(gōng)試液增菌後無(wú)菌生長，陽性對照試驗(yàn)菌(jūn)長(cháng)出(chū)，就(jiù)可(kě)發未檢出(chū)控(kòng)製菌。

62，如何理解“菌落蔓延(yán)成片不(bù)以計數(shù)"？如10-1級(jí)有1個皿的菌(jūn)落(là)成片(piàn)是(shì)否(fǒu)用(yòng)10-2級來(lái)計數？

答(dá)：是(shì)的。

63，如何(hé)避(bì)免(miǎn)菌(jūn)落成片(piàn)？

答：1，培養基(jī)傾(qīng)注(zhù)時溫(wēn)度(dù)不(bù)宜(yí)過(guò)高，可(kě)減(jiǎn)少(shǎo)傾(qīng)注後培養皿裏的(dí)水蒸(zhēng)汽(qì)太多(duō)而造(zào)成菌落容易漫(màn)延(yán)，或者加蓋(gài)“陶(táo)瓦蓋"吸(xī)收水蒸(zhēng)汽；2，細(xì)菌(jūn)計數時，在(zài)每100ml營養瓊(qióng)脂培養(yǎng)基(jī)中(zhōng)加入滅菌的1%氯化四氮(dàn)唑0.1ml，可使(shǐ)生成的(dí)菌落(là)變紅(hóng)色(sè)，容(róng)易點計(jì)，也(yě)可在一定(dìng)程(chéng)度(dù)上抑製(zhì)菌(jūn)落漫(màn)延(yán)。

64，請問一下對於生(shēng)長(cháng)速度快，易(yì)蔓延(yán)的(dí)菌有什(shí)麼(mó)好(hǎo)的方法控製(zhì)，該如何計數，如采用陶瓦蓋培養時間要(yào)不要(yào)延(yán)長？

答：請看(kàn)上(shàng)一題(tí)的說(shuō)明(míng)。如(rú)用陶瓦蓋，培養時間不需(xū)要延長。

65，請(qǐng)問若(ruò)細(xì)菌(jūn)，酵(jiào)母(mǔ)菌平(píng)均(jūn)菌落(là)數不(bù)在(zài)其(qí)宜(yí)選取的範圍(wéi)內(nèi)，即大(dà)於(yú)300及100cfu時，該如何(hé)報告(gào)菌數？另05版藥典(diǎn)的規定(dìng)範(fàn)圍是(shì)30~300/30~100，倘若(ruò)當(dāng)菌(jūn)落數(shù)大於(yú)300及100，如(rú)何(hé)報(bào)告？

答：應(yīng)該重(zhòng)新試(shì)驗，將(jiāng)稀(xī)釋(shì)級再往進(jìn)一(yī)步(bù)稀(xī)釋，直到(dào)能(néng)有可報(bào)告(gào)的(dí)稀(xī)釋(shì)級。可(kě)在工(gōng)作(zuò)中(zhōng)以(yǐ)對(duì)產(chǎn)品的認識將(jiāng)稀(xī)釋(shì)級調整到可(kě)報告的級別(bié)進行(háng)檢(jiǎn)驗(yàn)。

66，請問對(duì)於(yú)抑(yì)菌(jūn)性難(nán)以(yǐ)消(xiāo)除(chú)的(dí)粉末(mò)狀(zhuàng)樣(yàng)品(pǐn)，采(cǎi)用的消(xiāo)除抑菌(jūn)性的方法是什(shí)麼(mó)？

答：如(rú)果能(néng)溶於(yú)水，目(mù)前(qián)來說(shuō)，的(dí)除(chú)菌(jūn)方法(fǎ)是(shì)薄膜(mó)過(guò)濾法；其(qí)次(cì)是(shì)找到相應的(dí)中(zhōng)和(hé)劑(jì)。

67，我(wǒ)們生產(chǎn)的產(chǎn)品為(wéi)外用搽劑(jì)非無菌產品，需要對所(suǒ)有原輔(fǔ)料(liào)做(zuò)微生物(wù)限(xiàn)度(dù)檢(jiǎn)查(chá)嗎？

答：生(shēng)產企(qǐ)業(yè)對原(yuán)輔(fǔ)料的(dí)微(wēi)生物限(xiàn)度檢(jiǎn)查，應(yīng)根據自(zì)己的(dí)情況進行控(kòng)製。參(cān)見(jiàn)一(yī)部(bù)附(fù)錄P88（或二部附(fù)錄(lù)P116），微生物限度標準(zhǔn) 第7點(diǎn)。（個(gè)人(rén)意(yì)見：如(rú)果(guǒ)所用的原輔(fǔ)料直(zhí)接(jiē)投(tóu)料，就要控(kòng)製，如果(guǒ)還要(yào)進(jìn)一(yī)步提取等(děng)，則(zé)可通過控製中間產品(pǐn)的微生物(wù)限(xiàn)度來控製(zhì)。）

68，原輔料是(shì)否(fǒu)要單(dān)獨做方(fāng)法驗證(zhèng)？

答：所(suǒ)有要檢(jiǎn)查微(wēi)生物限度(dù)的品種(zhǒng)（當(dāng)然包括(kuò)原(yuán)輔料(liào)），都(dū)要做方法(fǎ)驗證。

69，中(zhōng)藥(yào)材的(dí)微生(shēng)物限度如何檢測？如(rú)超標(biāo)應如(rú)何控製(zhì)？

答：1.中藥(yào)材的(dí)微(wēi)生物限度檢查(chá)，參照(zhào)固體(tǐ)製(zhì)劑的供試液製(zhì)備(bèi)，並根(gēn)據給藥(yào)途徑執行標(biāo)準，如(rú)用於(yú)直接(jiē)投(tóu)料至(zhì)口服(fú)製劑(jì)的，還(huán)應檢(jiǎn)大(dà)腸菌群(qún)。2.如超標，具(jù)體(tǐ)問題(tí)具體分(fēn)析。

70，中(zhōng)間產(chǎn)品(pǐn)可(kě)否不做(zuò)微生物(wù)檢(jiǎn)測(cè)？

答：中間(jiān)產品應該(gāi)控(kòng)製微生(shēng)物限(xiàn)度，各企(qǐ)業(yè)應內(nèi)部(bù)質(zhì)控相關的(dí)具體要(yào)求(qiú)。

71，廠家用10-2稀釋(shì)級作驗證(zhèng)，那我(wǒ)們(mén)藥(yào)檢所作檢(jiǎn)查時是否從10-2稀(xī)釋(shì)級開始(shǐ)做(zuò)？

答：是(shì)的。

72，省(shěng)所做(zuò)微(wēi)生物(wù)限(xiàn)度(dù)時，廠(chǎng)家沒(méi)有做(zuò)驗證，那(nà)省(shěng)所(suǒ)是(shì)自(zì)己(jǐ)做驗(yàn)證，還(huán)是退(tuì)回去？又或者廠家的(dí)控製菌(jūn)驗證沒(méi)有做全（例(lì)如漏了沙(shā)門(mén)菌(jūn)沒做），那省(shěng)所(suǒ)怎麼處理(lǐ)？

答：1，如果是注冊檢(jiǎn)驗(yàn)，廠家沒有(yǒu)做(zuò)驗證，我們是(shì)不會接(jiē)收(shōu)樣品的，也(yě)就(jiù)是說(shuō)，沒(méi)做驗證(zhèng)或驗(yàn)證(zhèng)不(bù)全(quán)，肯定退回去(qù)。 2，如果(guǒ)是(shì)委(wěi)托檢(jiǎn)驗(yàn)，由(yóu)於(yú)是協議性(xìng)質，我們(mén)就(jiù)按協(xié)議(yì)進行(háng)檢(jiǎn)驗(yàn)。

73，微生物(wù)限度檢查時，隻(zhī)有(yǒu)細(xì)菌數(shù)不合(hé)格，那(nà)麼復試是否可(kě)以隻做細菌(jūn)數檢(jiǎn)查就行了？

答(dá)：可(kě)以。

74，樣品製(zhì)備中(zhōng)，如(rú)羧(suō)甲澱(diàn)粉(fěn)鈉等崩解(jiě)劑(jì)遇水(shuǐ)膨脹，經(jīng)試驗1g∕100ml仍為膠體漿糊狀，無(wú)法(fǎ)過(guò)濾(lǜ)且難與培養(yǎng)基(jī)融合(hé)，再(zài)加大(dà)稀(xī)釋倍數，則代(dài)表量(liáng)太少，請問這(zhè)種(zhǒng)輔料采用(yòng)何種方法進(jìn)行(háng)微(wēi)生物限度檢(jiǎn)查(chá)？

答：羧(suō)甲澱粉鈉應該沒(méi)有(yǒu)抑菌作(zuò)用(yòng)，無(wú)法過濾可(kě)用平皿法進(jìn)行檢(jiǎn)查(chá)，且供試液製(zhì)備時，稀(xī)釋劑(jì)的溫(wēn)度(dù)適(shì)當(dāng)調(tiáo)低(dī)些。

75，若樣(yàng)品(pǐn)對微(wēi)生物生(shēng)長(cháng)有促(cù)進(jìn)性，采(cǎi)用(yòng)薄膜過(guò)濾(lǜ)法(fǎ)應如(rú)何(hé)消(xiāo)除此影響(xiǎng)，或者有(yǒu)什(shí)麼其(qí)他方(fāng)法可(kě)以(yǐ)消除(chú)促進性以獲(huò)得(dé)更準確(què)結果？

答(dá)：采用(yòng)薄(báo)膜過(guò)濾法就是很好(hǎo)的消除(chú)影(yǐng)響的(dí)方法；藥典上規(guī)定(dìng)“供試液(yè)從製備到(dào)加(jiā)入檢(jiǎn)驗用(yòng)培養基不(bù)得(dé)超過1個(gè)小時"，就是(shì)考慮(lǜ)到樣(yàng)品對微生(shēng)物存在促進(jìn)或者抑(yì)製(zhì)作用的(dí)影響。因此要(yào)獲得(dé)更準(zhǔn)確的結(jié)果，就必(bì)需盡量(liáng)縮(suō)短(duǎn)從供試(shì)液(yè)的製備到(dào)加(jiā)入培養(yǎng)基的(dí)時間(jiān)。另(lìng)外，也可(kě)根據樣(yàng)品的(dí)特(tè)性有(yǒu)針對(duì)性(xìng)的(dí)加(jiā)入中(zhōng)和劑等。

76，控(kòng)製菌檢(jiǎn)查(chá)對(duì)於(yú)大腸(cháng)的檢查(chá)，MUG試(shì)驗中顯陽性或難(nán)以判斷時，“將(jiāng)培養液轉(zhuǎn)接到EMB"，這裏的培養液(yè)是指(zhǐ)MUG還(huán)是之前(qián)擴增(zēng)的(dí)BL？

答(dá)：藥(yào)典上(shàng)並(bìng)沒有“將(jiāng)培養(yǎng)液轉接(jiē)到EMB"這一描述。但(dàn)對於MUG和(hé)靛基質(zhì)試驗結(jié)果(guǒ)不(bù)一(yī)致時(shí)，是這麼(mó)規(guī)定的(dí)：“如MUG 陽性(xìng)，靛基質(zhì)陰性，或(huò)MUG 陰(yīn)性(xìng)，靛(diàn)基質(zhì)陽性(xìng)，則應取膽鹽乳糖(táng)培養(yǎng)基(jī)的培(péi)養(yǎng)物劃(huá)綫(xiàn)接種於曙紅亞(yà)甲(jiǎ)藍瓊脂(zhī)培養基或(huò)麥康凱瓊(qióng)脂(zhī)培(péi)養基的平(píng)板上(shàng)，培養18～24 小時(shí)。"

77，膽(dǎn)香(xiāng)鼻炎(yán)含(hán)有豬(zhū)膽(dǎn)汁膏，毛雞(jī)藥(yào)酒含有毛(máo)雞(jī)浸出夜，霍膽(dǎn)丸含豬膽(dǎn)粉，這(zhè)三個產(chǎn)品需(xū)要檢沙門菌嗎？

答：是(shì)的(dí)。（因(yīn)含(hán)豬膽汁(zhī)膏，毛雞(jī)，豬(zhū)膽粉(fěn)）。

78，微(wēi)生(shēng)物檢驗時(shí)，匀(yún)漿機應(yīng)把轉(zhuǎn)速調(tiáo)到多少(shǎo)才不會對微生物有損傷？

答：沒(méi)有相關的(dí)規定，目(mù)前(qián)一(yī)般(bān)使用轉速為3000-4000轉/分鐘(zhōng)。

79，如果(guǒ)使用藥典以外(wài)的培養(yǎng)基進(jìn)行(háng)微生物限度檢(jiǎn)查(chá)（比(bǐ)如TSA），怎(zěn)麼進行(háng)培養(yǎng)基適(shì)用性檢查(chá)，是(shì)否(fǒu)有合適的(dí)對照培養(yǎng)基？

答(dá)：可以參照(zhào)“藥品(pǐn)微(wēi)生(shēng)物檢驗替(tì)代方法驗(yàn)證指(zhǐ)導原(yuán)則"對(duì)所用(yòng)培養基的質(zhì)量(liáng)進行控製(zhì)。至於(yú)是否(fǒu)有(yǒu)相應的對照(zhào)培(péi)養基，要看(kàn)中檢(jiǎn)所是(shì)否(fǒu)來(lái)得(dé)及研製。

80，微(wēi)生物限度(dù)檢查(chá)的方法(fǎ)驗證，至(zhì)少應進(jìn)行3次獨(dú)立平(píng)行試驗(yàn)，每(měi)個(gè)獨(dú)立平行試驗可否使(shǐ)用不同批(pī)號的樣品？

答(dá)：可(kě)以，且(qiě)是用3個不(bù)同(tóng)批號樣(yàng)品進行驗證。

81，每(měi)個(gè)獨(dú)立的平行試驗是否(fǒu)有(yǒu)必要(yào)用(yòng)3個不同(tóng)批(pī)號(hào)的樣(yàng)品進行(háng)驗證(zhèng)？

答：用(yòng)3個不同批號(hào)的(dí)樣品進行驗證(zhèng)，可以增加(jiā)驗(yàn)證結果的重現性(xìng)。

82，微生物限度(dù)檢查(chá)中，培(péi)養基的(dí)適用性(xìng)檢查(chá)時對每個批號(hào)的培養(yǎng)基進(jìn)行(háng)還(huán)是(shì)對(duì)每次(cì)製(zhì)備好(hǎo)的培(péi)養(yǎng)基進(jìn)行？

答：請(qǐng)看《藥(yào)品微(wēi)生(shēng)物(wù)實驗(yàn)室規範指導(dǎo)原則》中，關(guān)於(yú)培養基(jī)第(dì)3點，質量控製試驗(yàn)的描述(shù)：“除藥(yào)典(diǎn)附(fù)錄另有(yǒu)規(guī)定(dìng)外，在(zài)實驗(yàn)室(shì)中(zhōng)，若采用已驗(yàn)證的(dí)配(pèi)製和滅(miè)菌程序(xù)製(zhì)備培(péi)養基且過程受控，那(nà)麼(mó)同一批(pī)脫水(shuǐ)培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可隻(zhī)進行(háng)一次。如果培(péi)養(yǎng)基的(dí)製(zhì)備(bèi)過程未經(jīng)驗(yàn)證，那麼每(měi)一(yī)批培養(yǎng)基(jī)均(jūn)要進(jìn)行適(shì)用(yòng)性(xìng)檢查試(shì)驗(yàn)，試(shì)驗的(dí)菌(jūn)種(zhǒng)可(kě)根(gēn)據(jù)培養(yǎng)基的(dí)用途(tú)從相關附錄(lù)中(zhōng)進(jìn)行選(xuǎn)擇，也可增(zēng)加(jiā)從生(shēng)產(chǎn)環(huán)境(jìng)及產(chǎn)品(pǐn)中(zhōng)常見的汙染菌株(zhū)。"

83，能(néng)否舉例說(shuō)明(míng)哪些培(péi)養基是指示(shì)能力檢查培(péi)養(yǎng)基(jī)？

答：請看“微生(shēng)物限(xiàn)度檢(jiǎn)查法"中表(biǎo)2。

84，05版(bǎn)SOP中有說經驗證後(hòu)控製(zhì)菌(jūn)可(kě)以(yǐ)不用(yòng)做陽(yáng)性(xìng)對(duì)照，10版(bǎn)是(shì)否(fǒu)有(yǒu)相同(tóng)的說(shuō)法(fǎ)？已(yǐ)建立(lì)控製(zhì)菌方法是否還需作陽性(xìng)對(duì)照？

答：藥(yào)典(diǎn)規定(dìng)，控製(zhì)菌(jūn)檢(jiǎn)查必需同時(shí)檢(jiǎn)查陽(yáng)性對照和陰(yīn)性對照。05版SOP《中(zhōng)國藥(yào)品(pǐn)檢驗標(biāo)準操作》中(zhōng)並沒有(yǒu)說經(jīng)驗證後控製(zhì)菌(jūn)可(kě)以不用(yòng)做陽性對(duì)照，不知(zhī)你所(suǒ)說的(dí)是(shì)那個SOP？

85，請問(wèn)化藥軟(ruǎn)膠(jiāo)囊(náng)還需(xū)要檢沙(shā)門(mén)菌嗎？

答(dá)：如(rú)果(guǒ)是口服製劑(jì)，有動(dòng)物藥(yào)投(tóu)料就必需檢(jiǎn)查。

86，微(wēi)生(shēng)物(wù)方法驗證(zhèng)過程(chéng)中，供(gōng)試液(yè)的(dí)製備，檢(jiǎn)細菌與黴(méi)菌及(jí)酵母菌處理(lǐ)不一樣，這樣(yàng)方法(fǎ)是(shì)否能成立(lì)？

答(dá)：*有可(kě)能(néng)。檢查方法是經(jīng)驗證的，對(duì)於(yú)有(yǒu)抑菌作(zuò)用的品(pǐn)種，經(jīng)驗證(zhèng)後細菌計數(shù)方(fāng)法與黴(méi)菌及酵母菌的檢查方法(fǎ)不(bù)一(yī)樣，這(zhè)很正常，隻要方(fāng)法(fǎ)是(shì)經驗證(zhèng)，符(fú)合藥(yào)典(diǎn)要(yào)求就可(kě)以。

87，2010版(bǎn)藥典(diǎn)控(kòng)製(zhì)菌培養(yǎng)溫度降(jiàng)低(dī)到30~35℃，那麼(mó)以(yǐ)2005版(bǎn)藥典驗證(zhèng)過(guò)程控製菌檢(jiǎn)驗方法，2010版藥典還(huán)需要再驗(yàn)證嗎？

答：是的(dí)。

88，檢(jiǎn)大腸埃希菌(jūn)時，MUG觀(guān)察一(yī)定要(yào)5小時觀(guān)察，是否可以隻在24h觀察(chá)？

答(dá)：可以。

89，培(péi)養基適(shì)用性(xìng)檢(jiǎn)查塗(tú)布時(shí)如何考(kǎo)慮（或消除）塗(tú)布(bù)棒上沾(zhān)到(dào)菌落(là)的影響？

答：塗布時(shí)，試(shì)驗用培養(yǎng)基與對(duì)照(zhào)培(péi)養基都同(tóng)樣操(cāo)作(zuò)，所以(yǐ)這(zhè)個影響(xiǎng)是同(tóng)等的(dí)，可(kě)不需考慮。

90，純化(huà)水要(yào)多(duō)少(shǎo)ml過濾，是不是原液要不要(yào)衝(chōng)洗液衝洗？要(yào)不要陰性對照？

答：過(guò)濾多少(shǎo)ml可根(gēn)據樣品微生物汙染(rǎn)的程(chéng)度來(lái)決定，隻(zhī)要(yào)zui終(zhōng)每膜(mó)上(shàng)的菌落(là)不超(chāo)過點計要求（即100cfu）就行(háng)了，結果報(bào)告時將(jiāng)菌(jūn)落數除以ml數即(jí)可。可(kě)以(yǐ)不用衝(chōng)洗(xǐ)。必需(xū)做陰(yīn)性(xìng)對照。

91，用稀釋法檢(jiǎn)驗控(kòng)製菌的時(shí)候(hòu)，金(jīn)黃色葡萄球(qiú)菌(jūn)是10ml（相(xiāng)當(dāng)1g，1ml）至500ml肉(ròu)湯，能否(fǒu)用2ml至100肉(ròu)湯(tāng)？

答：可以，但(dàn)應(yīng)該(gāi)同(tóng)時做5份，使(shǐ)檢(jiǎn)驗用的(dí)樣品總量(liáng)達到(dào)1g（或1ml）。

92，保留2倍(bèi)有(yǒu)效(xiào)數字（細(xì)菌，黴菌(jūn)報告數(shù)）如果檢出細菌(jūn)是1160cfu/g，是否(fǒu)報(bào)告數(shù)必須(xū)寫(xiě)成1.1*103cfu/g，還(huán)是直接寫1/100（不過(guò)這(zhè)樣好像不是2倍有(yǒu)效數(shù)字）。

答：報(bào)告數應(yīng)該寫(xiě)成1.2Χ103cfu/g或1200cfu/g。

93，怎(zěn)麼證明微生物(wù)限度中加(jiā)入的表麵活性(xìng)劑(jì)，中(zhōng)和(hé)劑或滅活劑的(dí)生長(cháng)和(hé)存(cún)活無毒(dú)性(xìng)？是在驗證(zhèng)中(zhōng)做稀(xī)釋(shì)劑(jì)對(duì)照(zhào)組就(jiù)可證明是否其無(wú)毒(dú)性(xìng)了(liǎo)嗎？還是？

答：是(shì)的(dí)，在驗證中做(zuò)稀釋(shì)劑對照組(zǔ)就(jiù)可(kě)證明是否其無毒性。

94，平皿稀釋法時，若(ruò)每(měi)一個平(píng)皿(mǐn)加(jiā)入(rù)0.5ml供試液，那麼(mó)，陰性(xìng)也是加(jiā)0.5ml嗎(má)？還(huán)是陰性加1ml？

答：陰(yīn)性(xìng)是檢(jiǎn)驗檢(jiǎn)測係統是否(fǒu)受微(wēi)生物汙(wū)染的(dí)試驗(yàn)，應該是(shì)取1ml稀釋(shì)液。

95，輔料中(zhōng)的香精（如楊梅香精），滑石(shí)粉(fěn)是否按非(fēi)水(shuǐ)溶(róng)性製劑供試品處(chǔ)理？*又如何(hé)處理(lǐ)呢？

答：香精和滑石(shí)粉(fěn)，如(rú)果(guǒ)能分散(sàn)於(yú)水(shuǐ)中，或者加(jiā)表麵(miàn)活性劑後能分(fēn)散(sàn)於水中就(jiù)可以(yǐ)，不一定非(fēi)要按(àn)非(fēi)水(shuǐ)溶(róng)性製劑製備(bèi)供(gōng)試(shì)液(yè)。*可(kě)溶(róng)於水(shuǐ)，可按普通(tōng)檢品檢(jiǎn)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證(zhèng)處理。

96，有兩種(zhǒng)製(zhì)劑形式(shì)的(dí)原料(liào)藥該如何製定(dìng)衛生學(xué)指標呢？如一種(zhǒng)原(yuán)料(liào)藥可用(yòng)於口(kǒu)服(fú)製劑(jì)以(yǐ)及外用(yòng)製劑(jì)？

答(dá)：可(kě)以按(àn)要投(tóu)料的(dí)劑型(xíng)進(jìn)行控製，或者(zhě)直(zhí)接按(àn)要(yào)求嚴(yán)格(gé)的一(yī)種來要(yào)求(qiú)。

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